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高山红景天甙对阿霉素肾病大鼠MMP 、TGF及IL的影响

http://www.51xue.org.cn  2007/6/8 源自:中华职工学习网 【字体: 字体颜色

【摘要】  目的  研究高山红景天甙对肾小球肾炎的治疗作用及机理。方法  阿霉素肾炎大鼠以高山红景天甙灌胃,给药后与对照组及正常组比较肝功、肾功、血脂、尿蛋白及血清MMP-2 、MMP-9、TGF-β1、IL-10、IL-2的含量。结果  治疗后肾炎大鼠尿蛋白含量降低(P<0.01),血白蛋白回升(P<0.05),血胆固醇下降(P<0.05),而血谷丙转氨酶、谷草转氨酶及血肌酐变化不明显,MMP-2、MMP-9均明显增加(P<0.05)。TGF-β1明显下降(P<0.05),IL-10明显增加(P<0.05),IL-2治疗后降低但(P>0.05)。结论  高山红景天甙(1)具有降低肾炎大鼠尿蛋白及血脂作用;(2)对大鼠的肝功能,肾功能无明显影响;(3)调节合成、降解酶及炎症因子降低阿霉素肾炎大鼠细胞外基质增生。

  【关键词】  高山红景天甙;肾炎;基质金属蛋白酶;TGF-β1;IL-10;IL-2


  肾小球疾病主要侵犯双肾肾小球,是引起慢性肾衰(尿毒症)的主要疾病[1]。目前多数认为起病为免疫失调,循环免疫复合物沉积及原位免疫复合物形成产生炎症而致病[1]。高山红景天是长白山地区珍稀药物植物,抗炎、抗脂质过氧化、增强SOD活性、清除自由基、双向调节机体的免疫力[2,3]。喂服红景天可降低阿霉素大鼠尿蛋白及血脂[4],红景天制剂对肾炎有治疗作用[5] 。本试验探讨高山红景天能否干预细胞外基质降解而延缓肾小球硬化。


  1  材料与方法


  1.1  主要材料


  1.1.1  动物  30只Wistar雌性大鼠,体重180~200g/只,购自吉林大学动物部。


  1.1.2  高山红景天甙  吉大二院肾内研究室提取。


  1.1.3  阿霉素  由深圳万乐药业有限公司生产。


  1.1.4  蛋白酶试剂盒  购自上海森雄科技实业有限公司。


  1.1.5  ELX800酶标仪、CL-5000超低温冰箱  日本产。


  1.1.6  日立生化分析仪  日本产。


  1.2  实验方法


  1.2.1  肾炎模型建立  参照鲁斌等[6]阿霉素肾病模型的制作方法。分3次大鼠尾静脉注射阿霉素,间隔7天先后按3mg/kg、2mg/kg、2mg/kg体重给药,第21天后留取尿液,查24h尿蛋白定量。


  1.2.2  动物分组  随机将30只大鼠分为:(1)正常组(n=10);(2)模型组(n=10):制作模型成功后,未给予药物治疗;(3)治疗组(n=10):模型成功后,每日给予红景天甙液1.5ml(相当于生药20g/kg体重),连续灌胃28天。


  1.2.3  观察指标与方法  于治疗前及完成后,以代谢笼收集各组大鼠24h尿液,磺基水杨酸比浊法测定尿蛋白含量,用ELISA方法分别检测各组血清MMP-2 、MMP-9、TGF-β1、IL-10、IL-2的含量,并测肝功、肾功、血胆固醇。


  1.2.4  统计学方法  对各组结果进行组间t检验,结果以均数土标准差(x±s)表示,P<0.05为有统计学差异。


  2  结果


  2.1  尿蛋白含量(mg/24h)变化测定结果  见表1。表1  尿蛋白含量(mg/24h)变化测定  (略)注:与正常组相比*P<0.01


  治疗后大鼠尿蛋白含量降低(P<0.01),未达到正常组的水平,而模型组的尿蛋白仍有增加,但P>0.05。


  2.2  经红景天治疗后肾炎大鼠血生化指标变化  见表2。 表2  红景天治疗后肾炎大鼠血生化指标变化  (略)注:与正常组相比ΔP>0.05,与正常组相比※P<0.05、与模型组相比☆P<0.05


  治疗后肾炎大鼠血谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肌酐变化不明显,血白蛋白回升(P<0.05)、胆固醇也有所下降(P<0.05),未达到正常。


  2.3  高山红景天治疗后各组血清MMP-2、MMP-9、TGF-β1、IL-10、IL-2  见表3。表3  高山红景天治疗后各组血清值比较  (略)注:P1治疗组与正常组相比;P2为治疗组与模型组相比。▼为与以往报道不符较正常低。※为模型组与正常组比


  MMP-2模型组较正常组明显增加P<0.05;MMP-9模型组较正常组明显减少P<0.05,治疗组均较模型组明显增加并超过正常组(P<0.05)。TGF-β1模型组较正常组增加P<0.05;治疗组较模型组明显下降(P<0.05),较正常组也低且P<0.05。IL-10模型组较正常组降低P<0.05,治疗组较模型组明显增加(P<0.05),并高于正常组。IL-2治疗后降低但P>0.05。

  3  讨论


  治疗后尿蛋白下降(P<0.01),治疗有效,未达到正常组水平,可能单用红景天甙肾炎未完全缓解,需合用其他药物,也可能疗程不够。阿霉素制作的急性肾病模型类似于人类微小病变表现,而慢性肾病模型类似于人类慢性肾炎或局灶节段性肾小球硬化[6]。近年来认为ADR大鼠肾病模型是自由基产生,脂质过氧化物形成,造成肾小球电荷障损害和分子控制缺乏,肾小球通透性改变和肾小管重吸收障碍[7],尿蛋白下降可能与抗自由基、调节免疫及抗炎作用有关,阻止肾小球滤过膜涎蛋白破坏,维持电荷屏障的完整性,减少尿蛋白的滤出。


  基质金属蛋白酶类(MMPs)分五类,MMP-2、 MMP-9属明胶酶类,主要降解ECM的主要成分之一Ⅳ型胶原[4,8],转化生长因子β1(TGF-β1)增加基质的产生、抑制降解[9],可能是上调PAI-1的表达,抑制纤溶酶及MMPs [3]。肾小球疾病进展的重要病理基础是肾小球细胞外基质(ECM)积聚[10],主要原因是ECM合成与降解的失衡[11]。MMP增加、TGF-β1下降,提示促进ECM降解,延缓肾小球硬化。模型组MMP-9含量降低与文献报道不符,在肾炎进展时,MMP早期代偿性增加以促进ECM降解[12]。原因考虑病情重发病早期即代偿能力低下,MMP-9未能升高。


  致炎性与抗炎性细胞因子在肾小球疾病中也发挥重要作用。抗炎性因子如 IL-4、IL-6、IL-10、IL-13等可拮抗致炎性因子IL-1、IL-2、TNF等的产生及致炎作用,影响肾脏炎症性疾病[12]。近年报道IL-10有利于缓解纤维化[13];肾病及肾炎活动期血清及尿液sIL-2R浓度分别高于缓解期,IL-2促进上皮细胞合成含硫化合物和蛋白质[12],IL-2加速肾炎进展。IL-10模型组较正常组降低(P<0.05),治疗组较模型组明显增加(P<0.05),并高于正常组。支持红景天治疗肾炎有效。IL-2各组比较P>0.05,但有降低趋势,支持红景天疗效。


  同时高山红景天甙对肾炎大鼠及正常大鼠的肝功能、肾功能无明显影响;而且治疗后的大鼠血胆固醇有所下降(P<0.05),血浆白蛋白有所上升(P<0.05)。


  综上所述,研究结果表明,高山红景天甙对肾小球肾炎具有明显的治疗作用,通过调节合成、降解酶及干预细胞因子影响ECM降解,延缓肾小球硬化;并且无明显毒副作用。此研究不仅为肾小球肾炎的治疗提供了一种新途径,同时也为高山红景天甙的开发及应用于临床提供了理论依据。


  【参考文献】


  1  叶任高,陆再英.内科学,第五版.北京:人民卫生出版社,2001,518-519.


  2  吴维春.高山红景天.长春:吉林科学技术出版社,1987,45-57.


  3  林文生,张农,张颂文,等.反义转化生长因子β1基因转染大鼠肾系膜细胞及其对纤溶酶原激活物抑制剂1和基质金属蛋白酶家族表达的影响.中华病理学杂志, 2000,29(4): 284-285.


  4  Borkakoti N. Matrix metalloproteinase:Variations on a theme.Prog Biophys Mol Biol, 1998,70(1):73-74.


  5  孙波,徐君东,闫国强,等.红景天对阿霉素大鼠尿蛋白、血脂的影响.中医药学报,2001,29(1):43-45.


  6  鲁斌,李新民,马融.对改良的阿霉素肾病模型的评价.实验动物科学与管理,1999,16(3):5.


  7  张秋枫,郑荣秀,田迎春.对改良的阿霉素肾病模型的评价,现代康复,1998,2(6):251-253


  8  MassovaL.FASEBJ, 1998,12(12):1075-1095.


  9  王伟铭,姚建,石蓉,等.TGF-β1对肾间质成纤维细胞Ⅲ型胶原表达的影响.细胞与分子免学杂志,2000,16(1): 29-31.


  10  秦蓉.PAI-1及其在肾小球硬化中的作用及意义.临床与实验病理学杂志,1998,14(6):579.


  11  Vssalli JD,Sappino AP,Belin D.The plasminogen activator/plasmin system.J Clin Invest,1991,88:1067


  12  汤颤,袁发焕.金属蛋白酶组织抑制因子-1、基质金属蛋白酶-9的表达与肾脏纤维化的关系.中国现代医学杂志, 2002,12(2): 284-285.


  13  陈建粮,李晓玫,王海燕,等.IL-10对人肾系膜细胞ICAM-1表达的抑制作用通过核因子KB介导.北京医科大学学报,1999,13:106-109.

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